微生物大小及数量的测定(2)

度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内有5-10个菌体为宜。每个计数室选5个中格（可选4个角和中央的1个中格）中的菌体进行计数。位于格线上的菌体一般只数上方或右边线上的。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作为两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。 5、清洗：

使用完毕后，将血细胞计数板及盖玻片按前面介绍的程序进行清洗、干燥，放回盒中，以备下次使用。 五、实验结果：

1、目镜测微尺的标定结果：

目镜测微尺每物镜 物镜倍数 目镜测微尺格数 镜台测微尺格数 格代表的长度/μm 低倍镜 高倍镜 油镜

2、微生物大小的测定 酵母菌大小的测定

组别 长度（μm）

枯草芽孢杆菌大小测定

组别 宽度(μm) 长度(μm)

3、酵母菌数量的测定

1 0.8 2.25 2 0.8 2.16 3 0.7 1.95 平均值 0.77 2.12 1 3.6 2 3.12 3 3.12 平均值 3.28 10 40 100 5 45 11 5 11 1 10 2.4 0.9 稀释20倍，计数板25中格*16小格

实验次数 各中格中菌数 总菌数 稀释倍数 平均值 菌数(个/mL) 1 4 5 2 3 1

六、实验小结：

实验成功应注意的事项有：

1、微生物大小测定时，观察时光线不宜过强，否则难以找到镜台测微尺的刻度；换高倍镜和油镜校正时，务必十分细心，防止接物镜压坏镜台测微尺和损坏镜头。

2、使用镜台测微尺进行校正时，若一时无法直接找到测微尺，可先对刻尺外的圆圈线进行准焦后再通过移动标本推进器进行寻找。

3、细菌个体微小，在进行细胞大小测定时一班应尽量使用油镜，以减少误差。 4、细菌在不同的生长时期细胞大小有时会有较大变化，若需自己制样进行细胞大小测定时，应注意选择处于对数生长期的菌体细胞材料。

5、活细胞是透明的，因此在进行显微计数或悬滴法观察时均应适当减低视野宽度，以增大反差。

6、进行显微技术时应先在低倍镜下寻找大方格的位置，找到计数室后将其移至视野中央，再换高倍镜观察和计数。 七、思考题：

1．为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？

答：由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 2．在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大小时，其测定结果是否相同？为什么？

答：不相同，不同放大倍数下测量的精度不同。

3．结合你的实验体会，总结哪些因素会造成血球计数板的计数误差？应如何避免？

答：（1）悬菌液未摇匀时取样，摇匀悬菌液。 （2）悬菌液浓度过高或过低，应适当梯度稀释。

（3）菌液滴到盖玻片上，重复计数使结果偏大，滴加菌液时缓慢谨慎，使菌液全部流入计数室内。

（4）计数室的选择不具有代表性看，不选相邻的计数室计数，可以选4个角和中间的任意小室计数。

（5）一会儿数芽体一会儿不数芽体，标准从一而终，数芽体或者不数。 （6）漏数了边线或多数了边线，一般选择上和左边线计数，即“计上不计下，计左不计右”。

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