《药用植物学与生药学》实验指导书绍兴文理学院元培学院

《药用植物学与生药学》

实验指导书

（供药学专业班用）

绍兴文理学院元培学院生命科学系

2013年2月

目 录

实验一 显微测量和显微描绘技术???????????????????1 实验二 生药的水分、灰分、浸出物及杂质检查法????????????6 实验三 植物细胞构造及后含物????????????????????8 实验四 保护组织、分泌组织?????????????????????9 实验五 机械组织、输导组织?????????????????????10 实验六 色谱法在中药鉴定中的应用????????????????? 11 实验七 黄连、黄芪、甘草、人参的鉴定????????????????12 实验八 番泻叶、金银花和红花的鉴定?????????????????14 实验九 茯苓、半夏、贝母和天麻的鉴定????????????????15 实验十 动物及矿物类中药????????????????????? 16 实验十一 中成药的显微鉴定???????????????????? 16 附录

1．常用试剂配制法 ?????????????????????????17 2．常用商品酸碱浓度表 ?????????????????????? 22 3．层离法常用显色剂????????????????????????23 4．绘图注意事项??????????????????????????24

I

一、实验注意事项：

1．根据教学进程，温习与本次实验有关的课堂讲授内容。 2．仔细阅读本次实验的内容，要求弄懂实验的原理与方法。 3．准备好各种自备的实验用品，如铅笔、橡皮、直尺、报告纸等。 二、实验过程中的几点要求：

1．遵守实验室规则，保持实验室安静。

2．实验认真，观察仔细，观察应当与思考结合起来，应当手、眼、脑三者并用。

3．由于实验时间有限，实验时应当善于安排自己的工作，注意力应当集中在主要问题上，不要用过多时间去钻研细小的次要问题，一时解决不了的次要问题，可留课外时间去解决。

4．在实验过程中，应当随时注意观察到的现象，测量或称量的数据，计算结果等写在报告纸上，养成能随时作出准确、清淅、整齐的记录而不需要重抄的良好习惯。

5．实验进行过程中，必须注意听取教师的指导。

6．实验桌前应随时保持整洁，非实验必要物品一律不许放在桌面或桌架上。 7．纸屑、废物应放人污物缸内，不得乱丢地上，污物缸内不得倒入液体。 三、实验完毕时的几点要求:

1．按照教师指定时间完成实验报告。

2．把实验用仪器、用品等收拾干净，放在指定位置。发放给个人保管的可放抽屉或柜内。

3．临时借用物品应及时归还。

4．值日生负责最后清扫实验室卫生，并及时清除污物缸内的废弃物。 5．实验结束后，检查门、窗、水、电，保证无安全隐患后方可离开实验室。

II

实验一 显微测量和显微描绘技术

一、目的要求

1.掌握徒手制片、粉末制片、表面制片和解离制片方法。 2.掌握生物显微镜使用及显微绘图技术。 3.掌握显微测微尺的校正和使用方法。 4.掌握描绘器的使用方法。 二、仪器、试剂

1．仪器 生物显微镜、酒精灯、盖玻片、载玻片、镊子、解剖针、擦镜纸、吸水纸、火柴、绘图铅笔(HB、2H、4H)、直尺和擦皮，以上是每次实验必备品。另需单面刀片或剃刀、烧杯、试管、目镜测微尺、载台测微尺、显微描绘器、绘图板、恒温水浴锅、量筒、粉碎机。

2．试剂 稀甘油、水、水合氯醛试液、甘油醋酸试液、间苯三酚试液、浓盐酸、10％铬酸、浓硝酸、10％硝酸、氯酸钾、5％～15％的氢氧化钾溶液。

三、实验材料 制作徒手切片和表面制片，可选用新鲜药材；制作粉末片，选用干燥药材的粉末，如：甘草、虎杖、麦冬、当归等。 四、实验内容 1．生物显微镜的使用 生物显微镜由光学部分和机械部分组成。光学部分包括成像系统——目镜和物镜，照明系统——聚光器、可变光栏和反射镜。物镜将标本作第一次放大，目镜将第一次放大的像作第二次放大，两者相乘即是观察到的放大倍数。机械部分包括镜座、镜臂、镜筒、载物台、粗细调节手轮及推动器或压夹。使用生物显微镜时，利用反射镜将外来光线导入聚光镜中，由聚光镜将光线会聚在标本上，用光栏调节光线强度。观察时视野范围内应均匀明亮，先用低倍镜观察，如需要放大，可将目的物调至视野中央，然后转换成高倍镜，仔细观察。

(1)低倍镜的操作法：1）将显微镜放置离桌缘约10cm处，镜臂应靠近胸前。2）对光。上升聚光镜到载物台水平，打开光栏至最大限度，再将低倍镜转至镜筒的正下方，使对准载物台上的透光孔(转动时，听到“得”一声，即已对正)然后用二手转动反光镜，同时从接目镜向下看，直至镜中出现一明亮而均匀的视野为止。3）装片。将欲观察的标本片从镜前方横置于载物台上，(注意盖玻片应向上)使标本对准透光孔的中央。4）调节焦距。从侧面注视接物镜与标本片之间的距离，向外旋转粗调节手轮，使镜筒慢慢下降，直至物镜几乎与标本片相接触，但切勿触及标本片，以免造成镜头与标本片的损坏。自目镜向下观察，同时向内旋转粗调节手轮，使物镜慢慢上升，直至在视野中看到清楚的物象为止。

若标本不在视野中，则慢慢移动标本片，使之适中，看到物象后，用压片夹固定制片，再转动细调节手轮，并调节光线，直到看到最清楚的物象为止，注意在显微镜中看到的是实物倒象。如果观察过程中发现清晰的图像逐渐模糊，说明调节手轮失灵，应进行检修。 (2)高倍镜的操作法：应先在低倍镜下选择物像，移至视野中心，换转高倍镜，应能看到欲观察之物象，用细调节手轮使之图象清晰。更换高倍镜时如出现镜头触及载玻片现象，则要检查标本切片是否放反，或高低倍镜是否配套。高倍镜头观察物象时，只能用细调节手轮调节焦距。

(3)使用显微镜注意点：1）取拿显微镜时，必须一手握住镜臂，一手托住镜座，轻取轻放，防止因撞击使镜头内各组透镜脱胶而影响观察的清晰度。2）每次观察标本片时，必须先用低倍镜观察，看清物象后，再换高倍镜。3）要注意保持显微镜的干燥和清洁，使用前后，均需将显微镜擦干净，注意镜头要用擦镜纸或绸巾单向擦拂，切勿用手、手帕或纸片等去擦，观察临时制片时，要防止水分或药液外溢以致沾污镜头及其他部分。

2．显微制片法

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（1）徒手制片法：系用刀片或徒手切片器将材料切成薄片，可在显微镜下观察组织构造、细胞特征的制片法，新鲜材料应除净泥砂，干燥材料需浸软后切片。本方法简便快速，能保持植物体原有结构的真像、色彩和内含物，适合于临时制片观察或显微化学实验，其缺点是切片较厚且厚薄不均一，不适合长期保存。

1)取材、固定与切片：选择已软化的中药材适当部位，切割成长2～3cm的小段，用拇指及食指和中指夹住材料，下端用无名指托住，另手持刀片，自左向右移动手腕，牵曳切片，动作要轻而快，力求切片薄而完整，操作时材料的断面与刀口须经常用水湿润。对于叶片或柔软的材料，需用稍坚固而易切的胡萝卜、马铃薯或实心大通草等将材料夹住进行切片。徒手切片器切片：将适当长度的材料夹入切片器上口外，旋转螺丝将材料固定紧，材料略露出圆盘平面，然后将切片刀或剃刀平放在圆盘上，自左向右平拉切片，同时转动切片器下端的升降调节轮，使材料上升，以利切片。

2)装片：将切好的薄片，用毛笔小心地移入盛有清水的培养皿中浸泡，取载玻片滴加甘油或试液，用镊子或毛笔将切片移于其上，再滴一滴甘油于片上，加上盖玻片，即可作临时制片观察；也可将薄片滴加水合氯醛液加热透化，再滴加稀甘油，加上盖玻片后进行观察。加盖玻片时，应尽量避免产生气泡。

（2）粉末制片法：将药材研粉，过筛(50-80目)后制片。此法是鉴定中药材最常用的方法之一，简便快速，主要鉴别细胞的形态特征。特别坚硬的药材可用锉刀将其锉成粉末。取粉末少许，置于洁净的载玻片上，滴加1～2滴蒸馏水或甘油醋酸试液，加上盖玻片，置显微镜下，可观察细胞中的不溶性物质如淀粉粒、脂肪油滴、色素颗粒等。如要观察细胞的形态特征，则应采用滴加水合氯醛加热透化后装片，以除去细胞中的淀粉、油脂等，增加细胞壁的折光率，从而使细胞的形态更加清晰。为防止水合氯醛结晶析出，水合氯醛透化后应滴加甘油，盖上盖玻片，擦净溢出液即可观察。

（3）表面制片法：多用于对叶片、果实或草本植物茎表皮组织的观察，可观察到表皮细胞形态、气孔类型、毛茸特征和着生情况等。通常用眼科镊子夹住叶片或果实等的表面，轻轻撕取其表皮层置于载玻片上的水、甘油或水合氯醛试液内，注意其上表面朝上方，加盖盖玻片，置显微镜下进行观察。

（4）解离制片法：系利用化学试剂使植物体的细胞与细胞间的中层物质溶解，细胞相互分离的方法。适用于研究细胞的立体形态结构，尤其适宜观察导管、管胞、石细胞和纤维等增厚壁的状况。欲解离的材料，需先切割成2mm的薄片。根据选用解离的试剂不同分： 1)氢氧化钾解离法：适用于柔软的植物材料。将切割好的材料置于坩埚中，加5％氢氧化钾溶液适量，加热至用玻棒挤压能离散为止。如离析的材料稍硬，可用6％～10％氢氧化钾液加热使之离析，尚可更换一次试液。待材料能被轻压离散时，倾去碱液，用水洗至中性，即可取所需部位加稀甘油制片观察。用氢氧化钾溶液能逐渐除去细胞中的淀粉、蛋白质、油脂及色素，其作用较水合氯醛强，并能使细胞膨胀，若作用时间较长，能使纤维性组织解离，并可引起薄壁组织的破坏和变形。所以加热处理时间不宜太长。

2)硝酸-铬酸离析法：适用于木质化组织，如木材、根、茎、树皮等材料，将材料放入坩埚或试管中，加10％硝酸与10％铬酸的等量混合液，其量为材料的20倍，放置浸渍的时间，视材料的性质而异，一般为1～2日或更长的时间。也可以采用加温的办法来缩短浸渍时间，以材料用玻棒轻压，可以离散为度，然后用水洗至中性，即可制片观察。

硝酸和铬酸均为强氧化剂，解离速度较快，如解离柔软较嫩的材料，应注意掌握时间，经硝酸、铬酸解离的材料，草酸钙、碳酸钙结晶及淀粉粒、脂肪油等均已消失。

3)氯酸钾法：本法适用于坚硬的材料，如木类及某些果实、种子坚硬的果皮、种皮等，将材料置坩埚或小烧杯中，加50％硝酸试液约5ml及氯酸钾粉少量，缓缓加热至沸，当气泡渐少时，再及时加入少量的氯酸钾，以维持气泡稳定产生(约15～20分钟)，至材料能分

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