感受态效率检测

感受态细胞效率检测

一、操作步骤：

1、从液氮中取三支新做的感受态细胞，置于冰上解冻，解冻后将三支感受态细胞混合成一管，轻轻摇匀。 2、转化：取50ul混合好的感受态细胞，加入1ul标准质粒，混匀后冰浴30min；

冰浴完毕，42℃热激70s； 热激后迅速置于冰上冷却2min。

3、向管中加入450ul无抗LB液体培养基，置于37℃摇床复苏30min。

4、将上述菌液摇匀后取100μl 涂于含Amp的平板上，37℃倒置培养14-16小时。

同时做三个对照:

对照组1: 以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液,其它操作与上面相同，涂于含Amp的平板上； 对照组2: 以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液,其它操作与上面相同，涂于含Kan的平板上； 对照组3: 以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液,但涂板时只取5μl 菌液涂布于不含抗生素的LB平板上

二、感受态效率评估：

1、统计每个平板中的菌落数。

2、计算转化频率，当转化频率达到107时，可用于连接及T5等产物的转化；

若转化频率只达到106时，只可用于质粒的转化。

3、对照组1，2正常情况下应在含抗生素的LB平板上应没有菌落出现；

对照组3正常情况下应产生大量菌落。 三、其他

1、转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子,根据平板中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率

转化子总数=菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积／涂板菌液体积 转化频率（转化子数／每ug质粒DNA）＝转化子总数／质粒DNA加入量(ug) 感受态细胞总数＝对照组3菌落数×稀释倍数×菌液总体积／涂板菌液体积 感受态细胞转化效率＝转化子总数／感受态细胞总数 标准质粒：pUC19 0.1ng/ul

2、感受态效率检测过程中要严格执行无菌操作，确保检测结果的准确性和可信度 3、此检测步骤适用于不同E.coli受体菌株的感受态细胞效率检测 4、检测完毕需对检测结果做详细记录

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