分子生物学实验室常用试剂的配制(2)

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量 0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50％甘油 水

1.5ml 1％溴酚蓝

1.5ml 1％二甲苯青FF

100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 3ml 3.9ml

6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量 0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40％聚蔗糖 水

1.5ml 1％溴酚蓝

1.5ml 1％二甲苯青FF

100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 4g

补足到10ml

10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量 0.2％溴酚蓝

0.2％二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0.1％SDS 50％甘油 水

20mg 20mg

4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ul 10％ SDS 5ml

补足到10ml

三.常用培养基

LB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 酵母提取物 氯化钠 10g 5g 10g

如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

SOB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 5g 1 mol/L 氯化钾 20g 氯化钠 2.5ml酵母提取物 0.5g

用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

SOC培养基

成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。

TB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 酵母提取物 甘油 12g 24g 4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。

2×YT培养基

将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 酵母提取物 氯化钠 16g 10g 4ml

如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

YPD培养基

将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 酵母提取物 葡萄糖 20g 10g 20g

用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

四.常用抗生素

氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）

溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）

溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）

溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）

溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）

溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

链霉素（streptomycin）（50mg/ml）

溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）

溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

四环素（tetracyyline）（10mg/ml）

溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

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