结核分枝杆菌抗体检测（胶体金法） 规程操作(2)

标准化操作规程 临检室 鄱阳湖第二医院检验科

别加入稀释菌液各0.5ml，最后血清血清稀释度为1：20，1：40，…，1：2560，充分振荡使其混匀，于35-37℃放置16-20小时判定结果。 6、结果判定

阴性对照管应无凝集（试验管底部分一沉淀点或呈均匀浑浊液） 以能清晰见到凝集反应（+）的最高稀释度为凝集效价

根据凝集反应的强弱或有无，分别以＋＋＋＋、＋＋＋、＋＋、＋、±、－记录。

7、该试验方法的局限性 需结合临床症状作出诊断。

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抗酸染色（萋纳法）操作规程

1、检验目的

本试剂盒用于细菌标本涂片或菌落涂片的染色。 2、检验原理

抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本的厚度，以提高检出率。染厚涂片时须掌握复染色时间。如果背景过深，影响镜检。奴卡菌及放线菌可呈弱抗酸性，取培养菌落涂片染色时，呈现两种现象，视野中有些菌阳性，有些菌阴性，有时间一个菌体上，红色的深浅亦有不同，观察时应予以注意。 3、试剂

3.1试剂名称：抗酸染色液

3.2生产厂家：温州市康泰生物科技有限公司 3.3试剂组成：

R1：石炭酸复红染液 20ml 250ml 100ml 20ml R2：脱色液 40ml 250ml 100ml 20ml R3：复染液 20ml 250ml 100ml 20ml 3.4包装规格：3×250ml、3×100ml、3×20ml 3.5储存条件及有效期：10℃-30℃储存有效期三年。 4、操作方法：

4.1 做一适当厚度的涂片，干燥后火焰固定 4.2 取一小于玻片的滤纸覆于其上。

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4.3 加满石炭酸复红染液于玻片上，在酒精灯上加热至冒蒸气，但切勿热至沸腾或烧干。

4.4 移开火，静置5分钟，拿掉滤纸，以自来水冲洗

4.5 一边摇动一边用脱色液脱色（大约1分钟），且不再有染色液浮出为止，完全脱色可避免产生假阳性结果

4.6 自来水冲洗后，滴加复杂注复染20-30秒，水洗。4.7 干后油镜观察 6、结果判定

分枝菌呈红色，背景为蓝色

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支原体（Uu/Mh）分离培养药敏试剂盒操作规程

1、检验目的

适用于临床解脲支原体和人型支原体的分离培养及药物敏感性试验。

2、检验原理

本试剂盒适用于解脲以原体和人型支原原体的分离培养及药物敏感性试验。试剂盒主要由支原体培养基和检测卡组成，培养基中含有支原体基础肉汤、马血清、酵母提取液、酚红指示剂、混合抗生素、生长因子、尿素和精氨酸等物质，当Uu和Mh生长时，尿素和精氨酸分解生成的碱性物质引起p上值上升，培养基由黄色变成红色。培养基内加有抑菌剂，可抑制生殖道中的细菌和真菌的生长。 3、试剂

3.1试剂名称：支原体（Uu/Mh）分离培养药敏试剂盒 3.2生产厂家：珠海迪尔生物工程有限公司 3.3试剂组成：

支原体培养基本功 20瓶 检测卡 20条 无菌矿物油 12ml*4瓶

每各式培养基的主要成份：基础粉25.5g、马血清200ml、

酵母粉4g、4g/L酚红4ml、混合抗生素1.5ml、尿素5g和精氨酸5g 4、标本要求：

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必需在用药前采集标本，支原体对细胞表面有很强的亲和力，应尽可能多收集细胞，标本采集后应尽快接种，不可在室温或普通冰箱久存，以免拭子干燥而使支原体活力降低甚至死亡。

男性：用男性无菌拭子由前尿道1~2cm处取尿液分泌物，根据病情需要，也可取前列腺按摩液、精液。

女性：采集宫颈分泌物，村本采集时应先擦去宫颈口多余粘液，再用另一支拭子在宫颈管内1~2cm处取宫颈分泌物。取材时要在宫颈内旋转并至少停留20秒，以便获得较多的细胞。

如果必须用尿液做支原体培养，可留取清晨中段尿10~20ml，高速离心后，取沉淀物接种，但尿液支原体培养的阳笥率明显低于尿道（或宫颈）分泌物。 5、操作方法：

本试验应注意无菌操作，避免污染。

1、 用无菌吸头吸取培养基100μl加入检测卡C-空白孔。 2、 将采集的标本拭子插入培养瓶，在靠近液面上方的瓶壁挤压旋转拭子数次，使拭子中样本渗入；若为精液、前列腺液标本，取200μl加入培养基中；若为中段尿，经2000转/分离心10分钟，取沉渣100μl加入培养基中。

3、 充分混匀接种标本中的培养基，取100μl加入检测卡的各孔中（除C-孔）。

4、 各孔滴加2滴无菌矿物油，盖上检测卡盖，置35℃~37℃孵箱培养，在24h和48h分别观察结果。

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6、结果判定

1、 阴阳性结果判定标准：黄色或橙黄色→阴性（-）；清晰透明红色→阳性（+）；混浊红色→污染。

2、 C-孔（空白孔）应为阴性，若为阳性表示有污染，本次试验无效。

3、 C+孔（对照孔）阴性（48h），可报告无Uu和Mh生长。 4、 C+孔（对照孔）阳性，应观察和记录其余各孔的结果，按下判读：

类型 结果 Uu孔（+）Uu≥104孔24h（+） 分离培养孔 Uu孔（+）Uu≥104孔48h（+） Uu孔（+）Uu≥104孔48h（-） Mh孔（+）Mh≥104孔48h（+） Mh孔（+）Mh≥104孔48h（-） 判定 检出解脲支原体阳性（Uu≥104cfu） 检出解脲支原体阳性（Uu＜104cfu） 检出解脲支原体阳性（Uu＜104cfu） 检出人型支原体阳性（Uu≥104cfu） 检出人型支原体阳性（Uu＜104cfu） 上孔（-）下孔（+）为敏感（S） 药敏孔 上孔（-）下孔（+）为中度敏感（I） 每种药物设高（上孔）、低（下孔）两个浓度 上孔（+）下孔（+）为耐药（R）

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