学生：细胞生物学实验

细胞生物学实验

1 考核方式

平时实验记录，实验报告，实验操作，考试笔试 2 考核内容

仪器设备使用；所开设实验：实验原理、步骤作用、试剂作用、结果分析、注意事项、实验异常原因分析；其它：实验安全，试剂使用注意事项，试剂配制，试剂标签包括的内容，等等。

2.1仪器设备使用

本课程重点掌握：普通双目显微镜，离心机，微量取液器，组织匀浆机

一般通用仪器：电子天平，恒温水浴，恒温培养厢，低温冰箱，烧杯，量筒，容量瓶，离心管，血球计数板。

生物技术专业加：系统显微镜及其自动曝光系统 2.2 开设实验

细胞化学：细胞总体蛋白和碱性蛋白的定位

理解运用固绿染色原理（例：pH5.5固绿染色的是哪些蛋白质？） 蛋白质两性电解质性质 固绿染色特点

细胞内蛋白质酸碱性 10%福尔马林作用？ 5%三氯乙酸作用？ 染色异常的原因分析 实验成功需要注意事项？

细胞化学：孚尔根（Feulgen）DNA染色法

理解运用实验原理。 固定液有什么作用？ 热盐酸处理的作用？

Schiff试剂的有效成分是什么？

漂洗液的有效成分是什么，有什么作用？ 显示DNA时，根材料的哪部分最好？

显微镜下怎样分辨细胞的间、前、中、后、末五个时期？ 一个良好的压片至少具备哪些特征？（列举3个） 实验成功的关键是什么？

细胞生理：细胞膜的通透性

理解运用实验原理。

能够从实验数据推理，得出结论。（例：从下表中数据和描述，你能得出什么结论？） 从EXCEL制图。 三线表制作。 图表格式的规范。（例：指出下表格式的欠规范之处）。

细胞分离技术：叶绿体的分离及荧光观察

掌握细胞分离的一般原理。取样原则？保护方法？细胞裂解方法及选择？ 差速离心。

叶绿体荧光分析。

台式离心机使用注意事项。（3项） 细胞机械匀浆机使用注意事项。（3项） 微量移液器规范使用。（移液器的选择，握持方法及注意事项，调取样量方法和注意事项，取液注意事项，排液注意事项，放置和保存方法和注意事项。）

实验结果异常分析，叶绿体破裂原因分析。

细胞的形态结构：液泡系和线粒体的活体染色

理解运用詹纳斯线粒体绿体原理？ 中性红染液泡原理？ Ringer液的作用? 实验失败原因分析。

染色体技术与核型技术：植物染色体标本的制备

理解运用常规压片法制备染色体标本原理。 获得良好分散的染色体的关键是什么？

细胞培养技术：植物原生质体的分离

酶解法制备原生质体的原理。 酶缓冲液的作用？ 甘露醇的作用？

游离出来的原生质体为什么要洗涤?

实验时数：3；开设要求：选做；实验性质：综合性；每组人数：1 实验失败原因分析。

细胞工程技术：鸡血细胞的体外融合

理解细胞融合用途。 细胞融合方法。 理解PEG。 GKN液作用。 Hanks作用。

理解50%PEG（m/v）。 各个步骤作用。 实验失败原因分析。

实验时数：3；开设要求：选做；实验性质：验证性；每组人数：1

综合性实验：秋水仙素对洋葱细胞多倍体的诱导作用

秋水仙素诱导植物多倍体原理。 剪根时辰。

如何从2、4、8体细胞混杂的植物组织获得纯四倍体植株？（设计方案和技术路线）。（如：秋水仙素诱导后获得的是不同倍性细胞的混合体。如果希望得到纯的多倍体植株，还需要后继哪些工作？

光学显微技术：显微摄影

2

显微摄影对胶片、光强和曝光时间的总的要求。 感光胶片的种类和性能。

显微摄影时，为什么要校正视差?怎样校正视差？ 摄影目镜的作用。 滤色镜的选用原则。

显微摄影的基本操作步骤。 理解运用影响曝光时间的因素。

以下附录仅供参考

附录Ⅰ：DNA Feulgen（孚尔根）染色法实验考试评分标准

一 理论部分（随机抽取以下一个问题，口头回答。分值10％） 二．操作部分 1 压片

压片前对根尖部分的取舍（5％）

盖玻片的规范放置、压片时的用力方向（5％） 2 压片结果：

细胞单层（10％） 无气泡（5％）

无因盖玻片的滑动二出现细胞核变形（长形）（5％） 3 显微观察

（对显微镜的）握镜方法（5％） 显微镜放置位置（5％）

光源使用（灯，光圈，聚光镜）合适（10％） 装片、调焦、变倍程序正确（5％） 用眼方法正确（5％）

姓名（号码） 项目 满分 回答问题 10 压片 取材 5 盖片，用力 5 压片结果 单层 10 无气泡 5 核变形 5 显微观察 握镜 5 位置 5 光源使用 10 调焦、变倍 5 用眼方法 5 结果描述 间期 5 前期 5 中期 5 后期 5 3

合计 末期 绘图 5 5 100

附录Ⅱ：细胞生物学实验考核 一、内容

1 基础理论：细胞周期各时相典型特征 2 显微镜使用 3 制片技术 二、记分

1 制片技术（35）

a 洋葱根尖处理：去伸长区，保留分生区适当长度（5） b 压片前根尖放置、滴加染液（或水）、盖玻片放置及其方法（5） c 压片过程：加吸水纸、握片、击压方法（10） d 压片结果：片面洁净（5），单细胞层（5），细胞（核）无因盖玻片的滑动、压片过渡造成的变形（5）

2 显微镜使用（30）

a 取镜、放镜动作姿势（5）

b 显微镜摆放位置（偏左，距台边距离）（5） c 操作：聚光（5），调焦（5），物镜转换（5），观察姿势（用眼姿势）（5） 3 基础理论：细胞周期各时相典型特征（25）

a 文字说明间期、前期、中期、后期、末期细胞的典型特征（10） b 绘图：正确判断并绘出5个时期（10），素描真实性、美观性（5） 4 其它操作：规范（10） 三、准备

1 经Feulgen染色的洋葱根尖（每人2根） 2显微镜（每人1台）

3 镊子、剪刀、解剖针、解剖刀（各一件），载玻片、盖玻片（各2片），吸水纸若干。 四、学生提交 1 制片

2 绘图：间期、前期、中期、后期、末期细胞DNA存在状态图

3文字说明间期、前期、中期、后期、末期细胞的典型特征（每期特征说明文字不多于20个）

附录Ⅲ 叶绿体分离及荧光观察实验考试评分标准

一 理论部分（随机抽取以下一个问题，口头回答。分值10％） 1 实验依据的原理是什么？

－

2 0.35 mol?L1 NaCl溶液有什么作用？

3 第一次离心（1000 rpm，2 min）的作用是什么？ 4 第一次离心（3000 rpm，5 min）的作用是什么？ 5 使用离心机时要注意哪些事项？ 二．操作部分

1 材料准备（菠菜叶）

洗涤、去水、剪叶（10％）

4

规范地用天平称取材料（10％）

规范地量取0.35 mol?L－

1 NaCl溶液（10％） 2 分离

正确使用离心机和离心技术（10％） 正确使用微量取液器（10％） 3 显微观察

（对显微镜的）握镜方法（5％） 显微镜放置位置（5％）

光源使用（灯，光圈，聚光镜）合适（5％） 装片、调焦、变倍程序正确（5％） 用眼方法正确（5％）

正确使用系统显微镜的荧光功能（5％） 4 实验结果描述

正确判断、指针指出、正确描述完整叶绿体（5％） 正确判断并描述完整叶绿体的荧光状态（5％）

考试评分表 姓名（号码） 项目 满分 回答问题 10 材料准备 洗－剪叶 10 天平称样 10 取液 10 分离 离心机使用 10 取液器使用 10 显微观察 握镜 5 位置 5 光源使用 5 调焦、变倍 5 用眼方法 5 荧光功能 5 结果描述 指出并描述 5 荧光状态 5 合计 100

附录Ⅳ 鸡血细胞融合实验考试评分标准

一 理论部分（随机抽取以下一个问题，口头回答。分值10％） 1 实验依据的原理是什么？ 2 鸡血中加入肝素有什么作用？

3 加入PEG之前，鸡血需要加溶液、离心，重复数次，这些步骤有什么作用？ 4 PEG诱导细胞融合，需要什么离子条件？ 5 PEG诱导细胞融合，需要什么pH条件？ 二．操作部分

5

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