胃肠道间质瘤的ckit基因突变检测

                    作者：杨锋 丁宝国 杨堂斗 贺慧颖 钟镐镐 李燕 郑杰 吴秉铨

【摘要】  目的 探讨CD117阳性的胃肠道间质肿瘤（GIST）c?kit基因突变分布及类型。方法 采用免疫组化技术，对10例GIST标本行CD117、CD34、SMA和S?100检测，以确诊为GIST；采用PCR技术对CD117阳性的GIST进行c?kit基因突变检测；采用直接测序方法对突变c?kit基因11、9、13和17号的外显子突变进行序列分析。结果 4例成功提取了肿瘤DNA，其中3例检出了c?kit基因突变，均分布于第11号外显子，均为557～558（WK）的缺失性突变；其中2例为纯合子性突变，1例为杂合子性突变。结论 CD117阳性的GIST通常有c?kit基因突变，其11号外显子是经典分布热点，变异纯合子和杂合子突变为常见类型。 
【关键词】  胃肠道间质肿瘤；DNA突变分析；c?kit基因
　　［ABSTRACT］ObjectiveTo explore the locus and types of c?kit (CD117) mutations in gastrointestinal stromal tumors (GIST).MethodsSpecimens of 10 GIST cases were detected immunohistologically for CD117, CD34, SMA and S?100 to confirm the diagnosis of GIST. For CD117?positive GIST, the mutation of c?kit was detected by PCR, and its exons 11, 9, 13 and 17 analyzed by direct sequencing technique.ResultsDNA was successfully isolated in four cases, in which, mutation of c?kit was found in three cases, all the genes detected were at c?kit exon 11 with codon 557-558(WK), homozygous mutation being noted in two cases and heterozygous in one.ConclusionThere is usually c?kit gene mutations in CD117?positive GIST, the exon 11 being classic “hot spot” of the mutations. The homozygous and heterozygous are their common types.
    ［KEY WORDS］Gastrointestinal stromal tumor; DNA mutationa analysis; c?kit gene
    胃肠道间质瘤（GIST）是近年来被认识并命名的新实体瘤，CD117（KIT蛋白）是其特异性敏感标志物[1]。GIST具有c?kit基因的11号外显子突变，从而导致酪氨酸激酶持续激活[2]。GIST对酪氨酸激酶抑制剂Gleevec治疗敏感[3]。基因诊断和分型为临床深入认识该病提供了重要前提[4]。本文探讨了GIST c?kit基因突变分布及类型，现报告如下。
　　1  材料和方法
　　1.1  标本及其来源
    收集胶南市人民医院外科收治的10例临床病理诊断为GIST的肿瘤石蜡包埋组织标本，其中男6例，女4例，年龄31～72岁。根据临床病理组织学形态特征将GIST分为：梭形细胞型4例，上皮样细胞型3例和两者混合型3例。肿瘤直径<2 cm、核分裂象<5/50 HPF（极低度侵袭危险性）3例，肿瘤直径2～5 cm、核分裂象<5/50HPE(低度侵袭危险性）2例，肿瘤直径5～10 cm、核分裂象<5/50HPF或肿瘤直径<5 cm、核分裂象(6～10)/50 HPF（中度侵袭危险性）2例，肿瘤直径>5 cm、核分裂象>5/50 HPF或肿瘤直径>10 cm或核分裂象>10/50 HPF（高度侵袭危险性）3例。
　　1.2  免疫组化方法
    将40 g/L甲醛溶液固定、石蜡包埋的组织制成4 μm连续切片，以CD117(A4502，1∶200)、CD34(M7165，1∶50)、SMA(M851，1∶100)、S?100(Z231，1∶200) 进行免疫组化标记。CD117免疫标记采用Envision两步法；余者均采用SP三步法[5]。
    CD117阳性细胞胞膜呈棕黄色；S?100阳性细胞胞核和胞质呈棕黄色；CD34、SMA阳性细胞胞质呈棕黄色。
　　1.3  c?kit基因突变检测分析

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